CCNB1/cyclin B1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400114-ACT

CCNB1 codifica a ciclina B1, uma subunidade regulatória central do complexo CDK1 que impulsiona a transição G2/M e coordena a entrada em mitose. O acúmulo e a translocação nuclear da ciclina B1 promovem a condensação dos cromossomos, a ruptura do envelope nuclear e a montagem do fuso mitótico, enquanto a degradação oportuna mediada por ubiquitina pelo APC/C favorece a saída da mitose. A atividade de CCNB1 integra-se a checkpoints de dano ao DNA e a vias de vigilância do ciclo celular para garantir a replicação e a segregação fiéis do genoma. A expressão desregulada de CCNB1 está frequentemente associada à proliferação aberrante, instabilidade cromossômica e fenótipos de ciclo celular ligados a tumores, tornando-o um marcador amplamente utilizado e um nó mecanístico em estudos de controle mitótico.

CCNB1/cyclin B1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CCNB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CCNB1/cyclin B1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CCNB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CCNB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CCNB1/cyclin B1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CCNB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CCNB1/cyclin B1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CCNB1/cyclin B1 em células tumorais com expressão de CCNB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.