CCK-AR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402419-ACT

O gene humano **CCKAR** codifica o receptor de colecistocinina A (CCK-AR), um GPCR de classe A ativado por peptídeos de colecistocinina que regula a sinalização associada à digestão e sinais de saciedade induzidos por nutrientes. Após a ligação do ligante, o CCK-AR aciona vias de proteínas G que modulam o cálcio intracelular e cascatas de quinases a jusante, coordenando respostas secretórias e a contratilidade do músculo liso em tecidos gastrointestinais. A atividade de CCKAR cruza-se com a comunicação neuroendócrina entre o intestino e o cérebro e influencia programas celulares ligados ao metabolismo e ao equilíbrio energético. A desregulação da sinalização de CCKAR tem sido investigada no contexto de fenótipos metabólicos e alterações funcionais gastrointestinais, reforçando a sua relevância para estudos mecanísticos de transdução de sinal mediada por receptores.

CCK-AR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CCKAR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CCK-AR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CCKAR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CCKAR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CCK-AR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CCKAR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CCK-AR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CCK-AR em células tumorais com expressão de CCKAR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.