CCDC89 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408069-ACT

CCDC89 (coiled-coil domain containing 89) codifica uma proteína prevista do tipo coiled-coil, implicada na organização do citoesqueleto e em redes de interação proteína–proteína que sustentam a arquitetura e a sinalização intracelulares. Proteínas coiled-coil frequentemente participam de funções de ancoragem/estrutura (scaffolding) que influenciam o posicionamento de organelas, o tráfego vesicular e vias responsivas ao estresse, sugerindo que a CCDC89 pode modular a coordenação espacial de processos celulares. Associações em nível de expressão e de variantes relatadas em conjuntos de dados genômicos indicam uma possível relevância de CCDC89 para programas transcricionais desregulados observados em contextos proliferativos e neurobiológicos, motivando estudos mecanísticos em modelos celulares relevantes para doenças. Definir como CCDC89 impacta a conectividade de vias pode esclarecer efeitos a jusante sobre transições de estado celular, fenótipos de adesão/motilidade e proteostase.

CCDC89 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CCDC89 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CCDC89 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CCDC89 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CCDC89, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CCDC89. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CCDC89 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CCDC89 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CCDC89 em células tumorais com expressão de CCDC89 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.