CBS Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419496-ACT

O gene **Cbs** de camundongo codifica a **cistationina β-sintase (CBS)**, uma enzima dependente de fosfato de piridoxal que catalisa a condensação de homocisteína e serina para formar cistationina na via de transulfuração. Ao controlar o fluxo de homocisteína em direção à biossíntese de cisteína e glutationa, a CBS influencia o equilíbrio redox celular, a capacidade de metilação e a homeostase de aminoácidos sulfurados, com efeitos a jusante sobre o estresse oxidativo e a função mitocondrial. A CBS também contribui para a produção endógena de sulfeto de hidrogênio, conectando a atividade de **Cbs** a processos de sinalização que modulam o tônus vascular e respostas inflamatórias. A desregulação do metabolismo dependente de CBS é amplamente usada para modelar a fisiopatologia associada à hiper-homocisteinemia e para investigar contribuições metabólicas para fenótipos neurovasculares e hepáticos em sistemas murinos.

CBS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cbs sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CBS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cbs em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cbs, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CBS. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cbs nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CBS no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CBS em células tumorais com expressão de Cbs silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.