Cbp CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401415-ACT

PAG1はCsk結合タンパク質（Cbp/PAG1）をコードしており、脂質ラフトに集積する膜貫通型アダプター分子です。CbpはCskをリクルートすることでシグナル伝達複合体の足場（スキャフォールド）として働き、Srcファミリーキナーゼ活性を抑制します。リン酸化されたドッキング部位を配置・組織化することで、CbpはT細胞受容体およびB細胞受容体の近位シグナルを調節し、下流のMAPKおよびPI3K経路のシグナルフラックスに影響を与え、受容体依存的な活性化閾値の形成に関与します。PAG1の発現量やリン酸化状態の変化は、免疫シグナルの制御不全、異常増殖、細胞接着や遊走の変化と関連づけられており、炎症性シグナルや腫瘍性キナーゼネットワークの研究において重要です。ヒト細胞では、Cbpは膜マイクロドメインの構造と、チロシンキナーゼシグナルをチェックポイント様に制御する機構とを結び付ける主要な結節点として機能します。

Cbp CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PAG1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Cbp CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PAG1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPAG1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Cbpの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPAG1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCbp依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPAG1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCbp経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。