CBARA1/MICU1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-418304-NIC

MICU1（CBARA1）は、ミトコンドリアカルシウムユニポーター複合体のCa2+結合性調節サブユニットをコードし、細胞質カルシウムシグナルに応答したミトコンドリアへのCa2+取り込みの閾値設定に寄与します。ミトコンドリアのCa2+恒常性を調節することで、MICU1は酸化的リン酸化、活性酸素種（ROS）のバランス、ならびにCa2+シグナルと代謝出力の連関に影響し、その下流でアポトーシスやストレス適応にも作用します。MICU1機能の破綻は神経筋および神経発達の表現型と関連づけられており、興奮性組織におけるミトコンドリアの生体エネルギー安定性の維持に果たす役割と整合的です。そのためMICU1は、ミトコンドリアシグナル伝達、細胞代謝、Ca2+依存的転写応答を結びつける経路において広く研究されています。

CBARA1/MICU1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MICU1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MICU1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MICU1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MICU1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。