CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401054-ACT

CNR2 codifica o receptor canabinoide 2 (CB2), um GPCR acoplado a Gi/o expresso predominantemente em linhagens imunes e hematopoéticas, que modula o tônus inflamatório e a migração de células imunes. Após a ativação, o CB2 inibe a adenilil ciclase, reduzindo a sinalização cAMP/PKA, e pode acionar as vias MAPK/ERK e PI3K/AKT, moldando a produção de citocinas, a quimiotaxia e programas de sobrevivência celular. A sinalização do CB2 cruza-se com redes de mediadores lipídicos e com o metabolismo de endocanabinoides, influenciando os estados de ativação de macrófagos e micróglia e respostas imunes inatas e adaptativas mais amplas. A desregulação da expressão ou da sinalização de CNR2 tem sido associada à inflamação mediada pelo sistema imune, a processos neuroinflamatórios e à dinâmica do microambiente tumoral-imune, sustentando sua utilidade como alvo mecanístico em pesquisas de imunologia e neurobiologia.

CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CNR2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CNR2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CNR2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CNR2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CB2/Cannabinoid Receptor 2/CNR2 em células tumorais com expressão de CNR2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.