Plasmide Double Nickase (h) CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1: sc-400648-NIC

CNR1 code le récepteur cannabinoïde 1 (CB1), un RCPG couplé à Gi/o qui répond aux endocannabinoïdes pour réguler l’activité de l’adénylate cyclase, la signalisation cAMP/PKA, la conductance des canaux ioniques, ainsi que des voies en aval liées à MAPK/ERK et à PI3K. CB1 est largement exprimé dans le système nerveux et contribue à la transmission synaptique, à la libération de neurotransmetteurs et à la plasticité dépendante de l’activité, avec des rôles supplémentaires dans des processus métaboliques périphériques et liés à l’immunité. Une altération de la signalisation CNR1/CB1 a été associée à des phénotypes neuropsychiatriques et neurodégénératifs, au traitement de la douleur et à des dérégulations métaboliques, ce qui en fait une cible fréquemment étudiée en pharmacologie des RCPG et dans les circuits neuromodulateurs. Dans des modèles cellulaires, la perturbation de CNR1 est utilisée pour étudier la désensibilisation et l’internalisation du récepteur, les biais de couplage aux protéines G et les interactions entre voies (cross-talk) affectant l’excitabilité neuronale et la signalisation inflammatoire.

CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CNR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CNR1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CNR1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CNR1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.