CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400648-NIC

CNR1はカンナビノイド受容体1（CB1）をコードしており、CB1はGi/o共役型のGPCRとして内因性カンナビノイドに応答し、アデニリルシクラーゼ活性、cAMP/PKAシグナル伝達、イオンチャネルのコンダクタンス、ならびに下流のMAPK/ERK経路やPI3K関連経路を調節します。CB1は神経系に広く発現し、シナプス伝達、神経伝達物質放出、活動依存的可塑性に寄与するほか、末梢における代謝や免疫関連プロセスにも役割を持ちます。CNR1/CB1シグナルの変調は、神経精神疾患および神経変性に関連する表現型、疼痛処理、代謝調節異常などと関連づけられており、GPCR薬理学や神経調節回路の研究において頻繁に解析される重要なノードです。細胞モデルでは、CNR1の改変を用いて、受容体の脱感作／内在化、Gタンパク質共役のバイアス、ならびに神経興奮性や炎症シグナルに影響する経路間クロストークを検討します。

CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CNR1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CNR1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CNR1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CNR1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。