cathepsin H Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402601-ACT

CTSH codifica a catepsina H, uma protease cisteína lisossomal que apresenta atividade tanto de endopeptidase quanto de aminopeptidase, contribuindo para a renovação intracelular de proteínas e o processamento de peptídeos. A catepsina H participa da proteólise dependente de lisossomos e interage com vias de tráfego endo-lisossomal que influenciam o processamento de antígenos, a remodelação da matriz extracelular e as respostas ao estresse celular. Alterações na expressão ou na atividade de CTSH têm sido associadas à desregulação de redes de proteases na inflamação, na neurodegeneração e em processos relacionados ao câncer, nos quais mudanças na função lisossomal podem afetar invasão, sobrevivência e sinalização imune. Como resultado, CTSH é frequentemente estudado no contexto da proteostase, da biologia do microambiente tumoral e da regulação de vias centradas no lisossomo.

cathepsin H O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CTSH sem alterar a sequência de ADN subjacente.

cathepsin H O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CTSH em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CTSH, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de cathepsin H. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CTSH nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de cathepsin H no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via cathepsin H em células tumorais com expressão de CTSH silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.