cathepsin E Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403406-ACT

O CTSE humano codifica a catepsina E, uma endopeptidase aspártica intracelular enriquecida em compartimentos endossomais e lisossomais, que contribui para a renovação de proteínas e o processamento de antígenos. A atividade da catepsina E sustenta a geração de peptídeos associados ao MHC de classe II e influencia a proteostase, o tráfego vesicular e a sinalização imune em contextos específicos de células epiteliais e imunes. Alterações na expressão de CTSE e na atividade proteolítica têm sido associadas a estados inflamatórios e à biologia tumoral, refletindo ligações entre a proteólise lisossomal, respostas ao estresse e a sinalização do microambiente. Essas propriedades tornam o CTSE um alvo útil para dissecar a regulação das vias endolisossomais e a modulação, dependente de proteases, de processos relacionados ao sistema imune.

cathepsin E O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CTSE sem alterar a sequência de ADN subjacente.

cathepsin E O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CTSE em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CTSE, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de cathepsin E. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CTSE nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de cathepsin E no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via cathepsin E em células tumorais com expressão de CTSE silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.