CAT-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403628-ACT

O gene humano SLC7A1 codifica o transportador 1 de aminoácidos catiônicos (CAT-1), um transportador de alta afinidade localizado na membrana plasmática que medeia a captação de L-arginina, L-lisina e L-ornitina. Ao regular a disponibilidade intracelular de arginina, o CAT-1 influencia a síntese de óxido nítrico, a biossíntese de poliaminas e programas mais amplos de detecção de aminoácidos que moldam o crescimento celular, o equilíbrio redox e a sinalização imune. A atividade do CAT-1 se cruza com vias endoteliais e inflamatórias por meio do fornecimento de substrato para sinalização dependente de NOS e para o metabolismo da arginina. A desregulação da expressão do SLC7A1 ou da capacidade de transporte tem sido associada à disfunção vascular, a fenótipos cardiometabólicos e a estados proliferativos alterados, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos sobre transporte de aminoácidos e interações entre vias de sinalização.

CAT-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC7A1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CAT-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC7A1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC7A1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CAT-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC7A1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CAT-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CAT-1 em células tumorais com expressão de SLC7A1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.