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CAT-1CRISPR激活质粒(h) | sc-403628-ACT | 20 µg | $397.00 |
人类 SLC7A1 基因编码阳离子氨基酸转运蛋白 1(CAT-1),这是一种位于质膜、具有高亲和力的转运体,介导 L-精氨酸、L-赖氨酸和 L-鸟氨酸的摄取。CAT-1 通过调控细胞内精氨酸的可用性,影响一氧化氮合成、多胺生物合成以及更广泛的氨基酸感知程序,从而塑造细胞生长、氧化还原稳态与免疫信号传导。CAT-1 的活性还通过为 NOS 依赖的信号以及精氨酸代谢提供底物,与内皮与炎症通路发生交叉。SLC7A1 的表达或转运能力失调与血管功能障碍、心脏代谢表型以及异常增殖状态相关,因此可作为研究氨基酸转运及信号串扰机制的关键节点。
CAT-1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SLC7A1的表达。
CAT-1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的SLC7A1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于SLC7A1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性CAT-1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的SLC7A1位点,并能够研究内源性位点上依赖于CAT-1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SLC7A1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CAT-1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。