CaSR Double Nickaseプラスミド (h): sc-401749-NIC

ヒトCASRはカルシウム感知受容体（CaSR）をコードしており、これは細胞外Ca2+を検知し、カルシウム恒常性を維持するために細胞内シグナル伝達を統合するクラスCのGPCRです。CaSRの活性化は主にGq/11およびGi/o介在性経路に共役し、ホスホリパーゼC、イノシトール三リン酸（IP3）依存的なCa2+動員、ならびに分泌・興奮性・分化に影響する下流のMAPKシグナル伝達を調節します。CaSRは副甲状腺および腎臓の生理機能と密接に関連しており、副甲状腺ホルモン分泌と腎尿細管でのカルシウム取り扱いを制御します。CASRシグナル伝達の破綻や遺伝的変異は、カルシウムバランスの異常および関連する内分泌表現型の疾患と関連するため、CaSRはGPCRシグナル伝達とミネラルイオン恒常性を研究する上で有用な標的（ノード）となります。

CaSR ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CASR 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CASR内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CASRの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CASRが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。