caspase-8 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400147-LAC

CASP8 codifica a caspase-8, uma protease iniciadora cisteína-aspartato que conecta a sinalização extrínseca de receptores de morte a cascatas de caspases a jusante e a programas regulados de morte celular. Quando ativada em complexos de sinalização indutores de morte, a caspase-8 cliva caspases efetoras e substratos-chave que moldam a apoptose, ao mesmo tempo que modula a comunicação cruzada com a necroptose por meio da regulação da sinalização de RIPK1/RIPK3. Além da morte celular, a CASP8 influencia vias inflamatórias e da imunidade inata, incluindo a sinalização a jusante de TNFRSF e de receptores de reconhecimento de padrões, com efeitos dependentes do contexto sobre a ativação de NF-κB. A expressão ou atividade desregulada de CASP8 tem sido associada a alterações na homeostase imune e na biologia tumoral, tornando-a um nó amplamente estudado em pesquisas sobre apoptose e inflamação.

As Partículas de Ativação Lentivirais caspase-8 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de CASP8 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais caspase-8 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição CASP8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de caspase-8. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo CASP8 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.