caspase-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400049-ACT

O CASP3 codifica a caspase-3, uma protease executora fundamental na apoptose, ativada a jusante das cascatas de sinalização intrínseca (mitocondrial) e extrínseca (receptor de morte). Após ser processada por caspases iniciadoras como a caspase-8 e a caspase-9, a caspase-3 cliva numerosos substratos para coordenar a fragmentação do DNA, a remodelação do citoesqueleto e o desmantelamento irreversível da célula. Sua atividade integra-se a vias de resposta ao estresse, incluindo a sinalização por p53, e é regulada por proteínas da família BCL-2 e por IAPs, conectando a competência apoptótica às decisões de destino celular. A sinalização desregulada de CASP3 é frequentemente estudada na biologia do câncer, na neurodegeneração e em contextos inflamatórios, nos quais limiares apoptóticos alterados contribuem para a sobrevivência ou a perda celular associada a doenças.

caspase-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CASP3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

caspase-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CASP3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CASP3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de caspase-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CASP3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de caspase-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via caspase-3 em células tumorais com expressão de CASP3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.