caspase-14 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419464
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- caspase-14 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico caspase-14, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:caspase-14 p10 Anticorpo (B-3): sc-515259
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
caspase-14 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419464 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O gene Casp14 de camundongo codifica a caspase-14, um membro atípico da família das caspases que contribui para a diferenciação terminal dos queratinócitos, em vez da sinalização apoptótica. A atividade da caspase-14 auxilia a formação da barreira epidérmica ao promover o processamento de substratos associados à diferenciação e ao influenciar fatores naturais de hidratação derivados da filagrina no estrato córneo. Por seu papel na cornificação e na homeostase da pele, alterações na expressão ou na atividade de Casp14 têm sido associadas a função de barreira prejudicada e a fenótipos inflamatórios cutâneos em modelos experimentais. Assim, a caspase-14 oferece um ponto de entrada mecanístico para estudar programas de diferenciação epitelial, respostas ao estresse de barreira e vias ligadas à queratinização.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO caspase-14 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Casp14 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Casp14, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Casp14 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína caspase-14.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Casp14 para a investigação da sinalização de caspase-14, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Casp14 críticos para a função caspase-14
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Casp14 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo caspase-14 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo caspase-14 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Casp14. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo caspase-14 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR caspase-14 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Casp14 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Casp14 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.