casein kinase IIα Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418515-ACT

CSNK2A1 codifica a subunidade alfa catalítica da caseína quinase II (CK2α), uma quinase de serina/treonina constitutivamente ativa que fosforila um amplo espectro de substratos nucleares e citoplasmáticos. A CK2α integra sinais em vias centrais que controlam a progressão do ciclo celular, as respostas a danos no DNA, a dinâmica da cromatina, a transcrição e a tradução, com funções documentadas nas redes de sinalização Wnt/β-catenina, NF-κB, PI3K–AKT e MAPK. Por meio da regulação da apoptose, da proteostase e da adaptação ao estresse, a CK2α contribui para a homeostase celular em múltiplos contextos teciduais. Alterações na atividade ou na expressão de CSNK2A1 têm sido associadas à proliferação desregulada e a fenótipos do desenvolvimento, sustentando sua utilidade como um nó mecanístico em pesquisas de sinalização relevantes para doenças.

casein kinase IIα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CSNK2A1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

casein kinase IIα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CSNK2A1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CSNK2A1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de casein kinase IIα. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CSNK2A1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de casein kinase IIα no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via casein kinase IIα em células tumorais com expressão de CSNK2A1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.