CART Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417375-ACT

O gene humano **CARTPT** codifica o transcrito regulado por cocaína e anfetamina (CART), um precursor de neuropeptídeos que é processado em peptídeos bioativos que atuam como neuromoduladores e sinais neuroendócrinos. Os peptídeos CART participam de circuitos hipotalâmicos que controlam o apetite, a homeostase energética e comportamentos relacionados à recompensa, integrando sinais endócrinos com a atividade sináptica. A expressão de **CARTPT** é regulada pela ativação neuronal e pelo estado metabólico, conectando-o a vias envolvidas na alimentação, respostas ao estresse e sinalização dopaminérgica. A desregulação da sinalização **CARTPT/CART** tem sido associada a fenótipos metabólicos como obesidade e traços de comportamento alimentar, bem como a aspectos neuropsiquiátricos e relacionados à adição em contextos de pesquisa translacional.

CART O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CARTPT sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CART O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CARTPT em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CARTPT, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CART. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CARTPT nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CART no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CART em células tumorais com expressão de CARTPT silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.