CARD 9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402214-ACT

A proteína 9 contendo o domínio de recrutamento de caspase (CARD9) é uma proteína adaptadora expressa predominantemente em linhagens mieloides, que acopla a sinalização de receptores de lectinas do tipo C às respostas imunes inatas a jusante. Ao reconhecer ligantes fúngicos e de outros microrganismos, a CARD9 integra sinais de receptores como Dectin-1 e Dectin-2 para promover a ativação das vias NF-κB e MAPK, a produção de citocinas associadas ao inflamassoma e a modulação de programas inflamatórios com polarização para Th17. Alterações genéticas e funcionais da CARD9 têm sido associadas a interações hospedeiro–microrganismo modificadas e a inflamação desregulada, incluindo maior suscetibilidade a infeções fúngicas invasivas e fenótipos inflamatórios mediados pelo sistema imunitário. Como um eixo de sinalização na interface entre o reconhecimento de padrões e o controlo transcricional, a CARD9 é amplamente estudada em vias que regulam a ativação mieloide, redes de citocinas e imunidade de barreira.

CARD 9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CARD9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CARD 9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CARD9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CARD9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CARD 9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CARD9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CARD 9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CARD 9 em células tumorais com expressão de CARD9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.