CapG Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416526-ACT

CAPG codifica a CapG, uma proteína ligadora de actina dependente de cálcio da família gelsolina/vilina, que “capa” as extremidades farpadas (barbed ends) dos filamentos de actina sem os seccionar, moldando assim a montagem de actina cortical e a remodelação do citoesqueleto. A CapG regula o ondulamento da membrana (membrane ruffling), a fagocitose, a adesão celular e a motilidade, ligando estímulos extracelulares a alterações dinâmicas na arquitetura celular. Estas atividades ligam o CAPG a vias que controlam a polimerização de actina e o tráfego dependente do citoesqueleto, incluindo processos coordenados por GTPases da família Rho e por sinalização associada a integrinas. A expressão desregulada de CAPG tem sido associada a fenótipos migratórios e invasivos alterados e é frequentemente estudada no contexto da progressão tumoral, da função de macrófagos e de microambientes inflamatórios.

CapG O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CAPG sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CapG O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CAPG em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CAPG, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CapG. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CAPG nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CapG no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CapG em células tumorais com expressão de CAPG silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.