CAML Plasmide Double Nickase (h): sc-403690-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CAML Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il CAML Double Nickase Plasmid (h) e il CAML Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira CAMLG. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CAML Antibody (B-12): sc-166557
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CAML Plasmide Double Nickase (h) | sc-403690-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CAML Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403690-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CAMLG codifica il ligando della ciclofilina modulatore del calcio (CAML), una proteina associata alla membrana del reticolo endoplasmatico che funge da regolatore della segnalazione intracellulare del Ca²⁺ e della biogenesi delle proteine di membrana. CAML partecipa a processi legati all’ingresso di calcio indotto dai recettori, all’omeostasi del RE e al traffico o alla stabilizzazione di specifiche proteine di membrana, influenzando così le vie a valle che regolano attivazione cellulare, sopravvivenza e risposte allo stress. È stata studiata nel contesto della segnalazione delle cellule immunitarie e di reti regolatorie generali associate al RE che modellano la proteostasi. Un’alterata gestione del calcio e le vie di stress del RE che intersecano meccanismi associati a CAML sono rilevanti per diverse patologie, inclusi disfunzioni immunitarie e adattamenti di segnalazione associati al cancro.
CAML Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CAMLG nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CAMLG. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CAMLG. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CAMLG interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.