Plásmido Doble Nickase (h) CaMKKβ: sc-400928-NIC

CAMKK2 codifica la quinasa quinasa 2 dependiente de calcio/calmodulina (CaMKKβ), una quinasa Ser/Thr situada aguas arriba que conecta la señalización de Ca2+–calmodulina con la fosforilación de AMPK y de CaMKI/CaMKIV, coordinando así la detección del estado energético celular, los programas transcripcionales y las respuestas al estrés dependientes de calcio. A través de estos nodos, CaMKKβ influye en la remodelación metabólica, la función mitocondrial, la autofagia y vías posteriores como mTOR y la señalización asociada a CREB. La actividad de CAMKK2 se ha estudiado en contextos que incluyen el metabolismo de células cancerosas, la inflamación y la polarización de células inmunitarias, y la señalización neuronal, lo que la convierte en un objetivo útil para analizar en detalle las cascadas de quinasas impulsadas por calcio. La perturbación de CAMKK2 puede alterar fenotipos de proliferación y supervivencia y se ha asociado, en sistemas experimentales, con cambios relevantes para la enfermedad en la regulación metabólica y neuroendocrina.

CaMKKβ El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CAMKK2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CAMKK2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CAMKK2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CAMKK2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.