CaMKKβ Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400928-NIC

CAMKK2 codifica a quinase quinase 2 dependente de cálcio/calmodulina (CaMKKβ), uma quinase Ser/Thr a montante que conecta a sinalização Ca2+–calmodulina à fosforilação de AMPK e de CaMKI/CaMKIV, coordenando assim a detecção do estado energético celular, programas de transcrição e respostas ao stress dependentes de cálcio. Por meio desses nós, a CaMKKβ influencia a remodelação metabólica, a função mitocondrial, a autofagia e vias a jusante como mTOR e a sinalização associada a CREB. A atividade de CAMKK2 tem sido estudada em contextos como o metabolismo de células cancerígenas, inflamação e polarização de células imunitárias e sinalização neuronal, tornando-a um alvo útil para dissecar cascatas de quinases acionadas por cálcio. A perturbação de CAMKK2 pode alterar fenótipos de proliferação e sobrevivência e tem sido associada, em sistemas experimentais, a alterações relevantes para doenças na regulação metabólica e neuroendócrina.

CaMKKβ O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CAMKK2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CAMKK2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CAMKK2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CAMKK2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.