CaMKII gamma Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400681-ACT

O CAMK2G humano codifica a CaMKII gama, uma quinase de serina/treonina dependente de Ca2+/calmodulina que converte transientes intracelulares de cálcio em programas de fosforilação que regulam a plasticidade sináptica, o acoplamento excitação–transcrição, a dinâmica do citoesqueleto e o tráfego vesicular. A CaMKII gama participa da sinalização de CaMK, com efeitos a jusante sobre a função de canais iônicos, respostas transcricionais ligadas ao CREB e interação (cross-talk) com as vias MAPK e PI3K/AKT. Em contextos não neuronais, o CAMK2G contribui para proliferação, migração e respostas ao estresse reguladas por cálcio, sustentando funções amplas no controle do estado celular. A desregulação da atividade da CaMKII e da sinalização de cálcio tem sido associada a fenótipos de neurodesenvolvimento e neurodegeneração, bem como a redes de sinalização alteradas na biologia do câncer, tornando o CAMK2G um nó útil para estudos mecanísticos.

CaMKII gamma O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CAMK2G sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CaMKII gamma O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CAMK2G em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CAMK2G, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CaMKII gamma. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CAMK2G nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CaMKII gamma no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CaMKII gamma em células tumorais com expressão de CAMK2G silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.