Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CaMKII delta Double Nickaseプラスミド (h): sc-400811-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CaMKII delta Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- CaMKII deltaダブルニカースプラスミド（h）およびCaMKII deltaダブルニカースプラスミド（h2）は、CAMK2Dを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: CaMKII delta 抗体 (L-04): sc-100362
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CaMKII delta Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400811-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CaMKII delta Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400811-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CAMK2Dは、Ca2+/カルモジュリン依存性のセリン/スレオニンキナーゼであるCaMKIIδをコードしており、細胞内カルシウムシグナルを、興奮収縮連関、細胞骨格の組織化、遺伝子転写を制御するリン酸化プログラムへと統合する。CaMKIIδは、イオンチャネルおよびGタンパク質共役型受容体（GPCR）の下流に位置するCa2+依存性シグナル伝達カスケードに関与し、MAPKシグナル伝達や、CREBおよび関連制御因子によって媒介される転写応答などの経路を形成する。ヒト組織では、CAMK2Dの活性は心筋および平滑筋の生理学的文脈で研究されることが多く、カルシウム恒常性やキナーゼシグナルの変化が不適応性リモデリング表現型と関連づけられている。CaMKIIδシグナルの破綻は、心代謝および神経血管研究に関連するストレス応答、細胞生存、炎症性シグナル伝達ネットワークにおけるより広範な役割についても検討されている。
CaMKII delta ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CAMK2D 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CAMK2D内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CAMK2Dの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CAMK2Dが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。