Plásmido Doble Nickase (h) CaMKII beta: sc-402744-NIC

CAMK2B codifica CaMKII beta, una subunidad quinasa de serina/treonina dependiente de calcio/calmodulina que traduce los transitorios intracelulares de Ca2+ en eventos de fosforilación que controlan la señalización sináptica y la plasticidad estructural. CaMKII beta contribuye al ensamblaje del holoenzima y a las interacciones con F-actina, vinculando la entrada de Ca2+ con la remodelación del citoesqueleto, la dinámica de las espinas dendríticas y la expresión génica dependiente de la actividad. Actúa aguas abajo de la señalización glutamatérgica y de las vías de entrada de Ca2+, coordinando procesos como la potenciación a largo plazo y el desarrollo neuronal. La actividad o expresión desregulada de CaMKII beta se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y con una excitabilidad neuronal alterada, lo que respalda su relevancia en estudios mecanísticos de la función cerebral y de redes de señalización asociadas a enfermedad.

CaMKII beta El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CAMK2B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CAMK2B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CAMK2B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CAMK2B alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.