CaMKIδ Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403073-ACT

CAMK1D codifica CaMKIδ, una chinasi serina/treonina Ca2+/calmodulina-dipendente che converte i transitori di calcio intracellulari in eventi di fosforilazione, plasmando l’espressione genica e le decisioni sullo stato cellulare. CaMKIδ partecipa a reti di segnalazione del calcio che intersecano programmi trascrizionali collegati a CREB, risposte correlate alle MAPK e dinamiche del citoscheletro, sostenendo una regolazione dipendente dal contesto di proliferazione, differenziamento e segnalazione dello stress. Studi genetici e funzionali associano CAMK1D alla regolazione immunometabolica e alla segnalazione infiammatoria, con collegamenti riportati a fenotipi cardiometabolici e alla suscettibilità a malattie complesse in cui la segnalazione calcio-dipendente è disfunzionale. Queste caratteristiche rendono CAMK1D un locus utile per analizzare come l’attività chinasica guidata dal calcio influenzi gli output trascrizionali a valle in diversi tipi cellulari umani.

CaMKIδ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CAMK1D senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CaMKIδ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CAMK1D nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CAMK1D, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CaMKIδ. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CAMK1D nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CaMKIδ nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CaMKIδ nelle cellule tumorali con espressione di CAMK1D silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.