CaM III Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400953

Visão geral

CALM3 codifica a calmodulina III (CaM III), um sensor de Ca2+ altamente conservado que se liga e regula inúmeras proteínas efetoras, incluindo quinases e fosfatases dependentes de CaM, canais iônicos e componentes do citoesqueleto. Ao converter transientes de cálcio intracelular em alterações na atividade enzimática, a CaM III sustenta processos centrais como o acoplamento excitação–contração, o tráfego vesicular, a regulação da transcrição e a progressão do ciclo celular. A sinalização dependente de CALM3 se integra a vias como CaMK e calcineurina/NFAT, moldando a expressão gênica responsiva a estímulos e a adaptação celular ao estresse. A desregulação da sinalização cálcio/calmodulina tem sido associada ao remodelamento patológico em contextos cardiovasculares e neurológicos, tornando a perturbação de CALM3 útil para estudos mecanísticos de fenótipos impulsionados por Ca2+.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CaM III (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene CALM3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do CALM3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do CALM3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CaM III.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de CALM3 para a investigação da sinalização de CaM III, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) CALM3 críticos para a função CaM III
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos CALM3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CaM III Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CaM III Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus CALM3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CaM III Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CaM III (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia CALM3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo CALM3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.