calsequestrin 2 Double Nickaseプラスミド (m): sc-419472-NIC

マウスのCasq2は、心筋細胞の筋小胞体（SR）内腔に局在し、Ca²⁺を高容量で結合するタンパク質であるカルトセクエストリン2をコードしており、Ca²⁺貯蔵の緩衝と編成に関与する。カルトセクエストリン2は、リアノジン受容体複合体および関連するジャンクショナルタンパク質と相互作用することで、興奮収縮連関、カルシウム誘発性カルシウム放出（CICR）、ならびにSRへのCa²⁺再充填の動態の形成に寄与する。CASQ2機能の破綻は、細胞内Ca²⁺ハンドリングの異常、遅延後脱分極、そしてストレス誘発性の不整脈表現型と関連しており、心拍リズムの安定性を司る経路における重要な結節点となっている。そのためCasq2は、SR Ca²⁺恒常性の機構、心筋細胞シグナル伝達、ならびに遺伝性不整脈感受性の遺伝学的モデルにおいて広く研究されている。

calsequestrin 2 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Casq2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Casq2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Casq2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Casq2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。