calsequestrin 2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402912-ACT

CASQ2 codifica a calsequestrina 2, a principal proteína de ligação a Ca2+ no lúmen do retículo sarcoplasmático de cardiomiócitos, que atua como tampão do cálcio intraluminal e ajuda a moldar o acoplamento excitação–contração. Ao organizar o armazenamento e a liberação de Ca2+ nas proximidades dos complexos do receptor de rianodina, a calsequestrina 2 influencia a liberação de cálcio induzida por cálcio, o reabastecimento do RS e a sinalização de homeostase do cálcio. Perturbações na expressão ou na função de CASQ2 alteram a carga de Ca2+ no RS e a dinâmica de sua liberação, contribuindo para um manuseio anormal do cálcio e fenótipos celulares arritmogênicos. Essas propriedades tornam CASQ2 um nó-chave para o estudo do ciclo do cálcio cardíaco, das respostas ao estresse e dos mecanismos que ligam a desregulação do cálcio no RS a distúrbios hereditários do ritmo cardíaco.

calsequestrin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CASQ2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

calsequestrin 2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CASQ2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CASQ2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de calsequestrin 2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CASQ2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de calsequestrin 2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via calsequestrin 2 em células tumorais com expressão de CASQ2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.