calsequestrin 1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419471-ACT

O Casq1 de camundongo codifica a calsequestrina 1, uma proteína luminal do retículo sarcoplasmático com alta capacidade de ligação a Ca²⁺, que tamponiza Ca²⁺ e ajuda a moldar o acoplamento excitação–contração no músculo esquelético de contração rápida. Ao organizar o armazenamento e a liberação de Ca²⁺ em conjunto com a sinalização do receptor de rianodina e com a maquinaria de manejo iônico do RS, a CASQ1 contribui para a homeostase do cálcio, o desempenho contrátil e a adaptação dependente da atividade. Alterações na função ou na expressão de CASQ1 estão associadas a uma dinâmica intracelular de Ca²⁺ desregulada, maior suscetibilidade a dano de fibras musculares induzido por estresse e fenótipos de fisiologia muscular relevantes para estudos de miopatia e de respostas semelhantes à hipertermia maligna. Assim, Casq1 fornece uma ferramenta útil para investigar o tamponamento de Ca²⁺ no RS, a sinalização dependente de Ca²⁺ e mecanismos de doença do músculo esquelético em modelos murinos e sistemas celulares engenheirados.

calsequestrin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Casq1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

calsequestrin 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Casq1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Casq1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de calsequestrin 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Casq1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de calsequestrin 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via calsequestrin 1 em células tumorais com expressão de Casq1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.