Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
CALM Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-433276
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- CALM El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico CALM, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CALM Anticuerpo (A-2): sc-271224
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
CALM Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-433276 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Picalm (proteína de ensamblaje de clatrina con unión a fosfatidilinositol) codifica CALM, un adaptador citosólico que acopla la unión a fosfoinosítidos con la formación de fosas recubiertas de clatrina y la selección de carga durante la endocitosis. CALM regula la internalización de receptores, el reciclaje de vesículas sinápticas y el tráfico de endosomas, influyendo así en la homeostasis de membranas y en la dinámica de la señalización downstream. En sistemas de ratón, la alteración de Picalm puede modificar rutas de transporte intracelular y el flujo autofagia-lisosoma, procesos que a menudo se estudian en contextos neuronales y hematopoyéticos. Estudios genéticos y funcionales han vinculado la biología de PICALM/CALM con defectos de tráfico relacionados con la neurodegeneración y con programas de crecimiento celular desregulados, a través de cambios en el recambio de receptores y el transporte vesicular.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO CALM (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Picalm en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Picalm junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Picalm tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CALM.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Picalm para la investigación de la señalización de CALM, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Picalm críticos para la función de CALM
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Picalm para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido CALM CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CALM CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Picalm. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CALM (m) y el plásmido HDR CALM (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Picalm para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Picalm definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.