Calgranulin B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400801-ACT

S100A9 codifica a Calgranulina B, uma proteína da família S100 de ligação ao cálcio que forma um heterodímero com a S100A8 (calprotectina) e atua como um padrão molecular associado a dano (DAMP) na imunidade inata. A Calgranulina B é abundante em neutrófilos e monócitos inflamatórios, regula a adesão e a migração de leucócitos e amplifica a produção de citocinas e quimiocinas por meio de receptores como TLR4 e RAGE. Sua atividade está ligada à sinalização de NF-κB e MAPK, às respostas ao estresse oxidativo e à remodelação do microambiente inflamatório mieloide. A expressão desregulada de S100A9 é frequentemente estudada em doenças inflamatórias crônicas, na biologia mieloide associada a tumores e na imunopatologia relacionada a infecções, como marcador e mediador da ativação inflamatória.

Calgranulin B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de S100A9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Calgranulin B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus S100A9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição S100A9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Calgranulin B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus S100A9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Calgranulin B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Calgranulin B em células tumorais com expressão de S100A9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.