Calgranulin A Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400610-ACT

S100A8 codifica a calgranulina A, uma proteína da família S100 que se liga ao cálcio e que comumente forma o heterodímero S100A8/S100A9 (calprotectina) em células mieloides. A calgranulina A participa da sinalização imune inata e da amplificação inflamatória por meio de interações com receptores de reconhecimento de padrões, como TLR4 e RAGE, modulando a quimiotaxia, a adesão de leucócitos e a produção de citocinas. Ela está intimamente ligada a programas de ativação de neutrófilos e monócitos e é frequentemente utilizada como marcador de estados mieloides inflamatórios. A expressão desregulada de S100A8 tem sido associada a distúrbios inflamatórios crônicos, inflamação associada a tumores e remodelação do microambiente mediada por células mieloides, o que a torna relevante para estudos mecanísticos focados em vias de sinalização.

Calgranulin A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de S100A8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Calgranulin A O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus S100A8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição S100A8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Calgranulin A. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus S100A8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Calgranulin A no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Calgranulin A em células tumorais com expressão de S100A8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.