cadherin-24 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401990-ACT

CDH24 はカドヘリン24（cadherin-24）をコードしており、カドヘリン介在性の接着帯（アドヘレンスジャンクション）を介して上皮細胞間接着の構築と安定化に寄与する、カルシウム依存性の細胞—細胞接着タンパク質である。カドヘリン24は、形質膜上での同種親和性相互作用を支持し、カテニン関連複合体を介して細胞骨格ネットワークと連結することで、組織構築、極性、ならびに接触依存的なシグナル伝達に影響し得る。カドヘリンの発現パターンの変化は細胞間の結合性や遊走挙動の変化としばしば関連するため、CDH24 は発生や疾患関連表現型における接着のリモデリングを研究するうえで有用な標的となる。CDH24 の発現異常は、上皮の完全性や接着部位シグナルが破綻する状況で検討されており、細胞接着経路の機序研究に向けた機能的な切り口を提供する。

cadherin-24 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CDH24の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

cadherin-24 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CDH24 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCDH24転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性cadherin-24の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCDH24遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるcadherin-24依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCDH24発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるcadherin-24経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。