cadherin-19 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401716-ACT

ヒトCDH19は、カルシウム依存性の細胞間接着分子であるカドヘリン19をコードしており、神経系における組織構築の維持や協調的な細胞シグナル伝達を支えます。古典的カドヘリンファミリーの一員として、カドヘリン19はホモフィリック相互作用およびカテニンとアクチン細胞骨格との機能的カップリングを介して接着帯（アドヒアレンスジャンクション）の形成に関与し、細胞極性・遊走・分化を制御する接着依存的経路に影響を与えます。CDH19の発現は発生プログラムや系譜（ライン）特異化と関連づけられており、複雑な組織における細胞間連結性や状態遷移を変化させる機構の研究において重要です。カドヘリン介在性接着の制御異常は、異常分化や浸潤性表現型を含む、疾患に伴う細胞挙動の変化にしばしば関与するため、神経生物学やがん関連モデルにおけるCDH19に焦点を当てた研究が動機づけられています。

cadherin-19 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CDH19の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

cadherin-19 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CDH19 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCDH19転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性cadherin-19の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCDH19遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるcadherin-19依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCDH19発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるcadherin-19経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。