Cacna2d1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402833-ACT

CACNA2D1 codifica a subunidade auxiliar α2δ1 dos canais de cálcio dependentes de voltagem, um regulador-chave do tráfego dos canais, da sua localização na membrana e das propriedades de abertura/fecho que moldam o influxo de Ca2+ durante a atividade elétrica. Ao ajustar a sinalização dependente de cálcio, Cacna2d1 influencia o acoplamento excitação–contração, a libertação de neurotransmissores e vias a jusante ligadas à regulação transcricional e às respostas celulares ao stress. Alterações na expressão de CACNA2D1 têm sido associadas a desregulação da homeostase do cálcio em contextos cardíacos e neuromusculares e têm sido estudadas em relação a fenótipos arritmogénicos, circuitos de sinalização da dor e excitabilidade neuronal. Como componente de um complexo de canais na superfície celular, oferece um ponto de entrada acessível para dissecar a sinalização do cálcio dependente de estímulos e o comportamento eletrofisiológico ao nível de redes em sistemas modelo humanos.

Cacna2d1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CACNA2D1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Cacna2d1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CACNA2D1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CACNA2D1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Cacna2d1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CACNA2D1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Cacna2d1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Cacna2d1 em células tumorais com expressão de CACNA2D1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.