CA XIV Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404085-ACT

O CA14 humano codifica a anidrase carbônica XIV (CA XIV), uma metaloenzima de zinco associada à membrana que catalisa a hidratação reversível do CO₂ em bicarbonato e prótons, regulando assim o pH extracelular e pericelular. Ao modular o fluxo de bicarbonato e a disponibilidade de prótons, a CA XIV acopla-se funcionalmente a sistemas de transporte iônico, como transportadores de bicarbonato e trocadores Na⁺/H⁺, influenciando a homeostase ácido–base em epitélios e neurônios. Alterações na atividade das anidrases carbônicas e a desregulação do pH estão associadas a processos como migração celular, fisiologia sináptica e adaptação metabólica, tornando o CA14 um alvo relevante para estudar o controle do microambiente em contextos associados a doenças.

CA XIV O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CA14 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CA XIV O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CA14 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CA14, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CA XIV. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CA14 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CA XIV no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CA XIV em células tumorais com expressão de CA14 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.