CA VIII Double Nickaseプラスミド (h): sc-403750-NIC

炭酸脱水酵素VIII（CA VIII）はヒトCA8遺伝子にコードされる、炭酸脱水酵素ファミリーに属する非触媒性のメンバーであり、CO₂の水和反応ではなく細胞内シグナル伝達の調節に関与します。CA VIIIはイノシトール1,4,5-三リン酸受容体1型（ITPR1）に結合してその活性を抑制し、小胞体からのIP₃依存的なCa²⁺放出を調整することで、神経細胞の興奮性、シナプス可塑性、小脳の運動協調に影響を及ぼします。CaMKやカルシニューリン依存性の転写プログラムを含むCa²⁺制御経路への影響を通じて、CA8はカルシウムシグナリングの恒常性維持にも寄与します。CA8の遺伝学的破綻や発現制御の異常は小脳機能障害や運動失調関連の神経生物学と関連づけられており、神経系におけるカルシウムシグナリングの機構研究において有用な標的となっています。

CA VIII ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CA8 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CA8内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CA8の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CA8が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。