CA VI Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419456

Panoramica

Car6 codifica l’anidrasi carbonica VI (CA VI), un metalloenzima secreto contenente zinco che catalizza l’idratazione reversibile della CO₂ a bicarbonato e protoni, contribuendo al tamponamento del pH extracellulare e all’omeostasi del bicarbonato in ambienti ghiandolari e mucosali. Modulando la dinamica dei protoni, la CA VI partecipa a processi legati al trasporto ionico epiteliale e al controllo del pH del microambiente, con possibili effetti sull’attività enzimatica, sulle interazioni con la matrice e sulla segnalazione cellulare. Nei modelli murini, l’espressione di Car6 è spesso utilizzata per studiare la regolazione, dipendente dalle anidrasi carboniche, dell’equilibrio acido-base extracellulare nei tessuti secretori. Un controllo del pH alterato è ampiamente rilevante nei modelli di infiammazione, rimodellamento tissutale e stress metabolico, rendendo Car6 un bersaglio utile per studi meccanicistici di fenotipi sensibili al pH.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CA VI (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Car6 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Car6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Car6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CA VI.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Car6 per lo studio della segnalazione di CA VI, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Car6 critici per la funzione di CA VI
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Car6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CA VI CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CA VI CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Car6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CA VI Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CA VI (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Car6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Car6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.