CA V CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419455

概要

Car5aは、ミトコンドリアの炭酸脱水酵素V（CA V）をコードする。CA Vは亜鉛を含む金属酵素で、ミトコンドリア・マトリックス内でCO₂の可逆的な水和反応を触媒し、重炭酸（HCO₃⁻）を生成する。この重炭酸の供給は、カルボキシル化依存性酵素に基質を提供することで、補充反応（アナプレロ―シス）や生合成反応を支え、Car5aを糖新生、尿素回路（尿素産生）、脂質およびアミノ酸代謝などの代謝経路と結び付けている。代謝需要の高いマウス組織では、CA V活性がミトコンドリアpHと炭素フラックスの調節に寄与し、その結果、細胞のエネルギーバランスや代謝物恒常性に影響を与える。ミトコンドリア炭酸脱水酵素機能の変化は代謝調節異常と関連づけられており、窒素処理や中間代謝に影響する疾患の文脈で研究することができる。

CA V CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCar5a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Car5a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Car5aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CA Vタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CA Vシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Car5a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CA Vの機能に不可欠なCar5aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Car5aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CA V CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCA V CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Car5a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CA V HDRプラスミド（m）および CA V HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCar5aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCar5a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。