CA V Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419455
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- CA V O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico CA V, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:CA V Anticorpo (A-1): sc-398184
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
CA V Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-419455 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Car5a codifica a anidrase carbônica mitocondrial V (CA V), uma metaloenzima de zinco que catalisa a hidratação reversível de CO₂ para gerar bicarbonato na matriz mitocondrial. Esse suprimento de bicarbonato sustenta reações anapleróticas e biossintéticas ao alimentar enzimas dependentes de carboxilação, conectando Car5a a vias metabólicas como a gliconeogênese, a ureagênese e o metabolismo de lipídios e aminoácidos. Em tecidos de camundongo com alta demanda metabólica, a atividade da CA V contribui para a regulação do pH mitocondrial e do fluxo de carbono, influenciando assim o balanço energético celular e a homeostase de metabólitos. Alterações na função da anidrase carbônica mitocondrial têm sido associadas à desregulação metabólica e podem ser estudadas no contexto de distúrbios que afetam o manejo do nitrogênio e o metabolismo intermediário.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CA V (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Car5a em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Car5a, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Car5a na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CA V.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Car5a para a investigação da sinalização de CA V, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Car5a críticos para a função CA V
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Car5a para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo CA V Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo CA V Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Car5a. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo CA V Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR CA V (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Car5a para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Car5a definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.