C9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401198-ACT

O C9 humano codifica o componente 9 do complemento, um efetor terminal da cascata do complemento que polimeriza no complexo de ataque à membrana (MAC) para perfurar membranas-alvo e promover lesão lítica. A função do C9 integra-se à sinalização imune inata por meio da ativação das vias clássica, das lectinas e alternativa, modulando inflamação, opsonização e depuração de patógenos. A atividade desregulada da via terminal do complemento e a deposição do MAC têm sido implicadas em dano tecidual e inflamação crônica em condições imunomediadas e degenerativas, sustentando o uso do C9 como um nó mecanístico para o estudo de patologias impulsionadas pelo complemento. A modulação experimental da expressão de C9 ajuda a investigar como a atividade terminal do complemento influencia respostas celulares ao estresse, a integridade de barreiras e as interações entre células imunes e tecidos.

C9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de C9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

C9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus C9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição C9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de C9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus C9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de C9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via C9 em células tumorais com expressão de C9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.