C3G Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401616-NIC

RAPGEF1 codifica a C3G, um fator de troca de nucleotídeos de guanina que ativa Rap1 e outras pequenas GTPases relacionadas para coordenar a adesão dependente de integrinas, a remodelação do citoesqueleto e a migração celular. Por meio do recrutamento mediado por adaptadores a jusante de receptores tirosina-quinase e de receptores imunes, a C3G ajuda a acoplar sinais extracelulares à sinalização de MAPK e Rap1, que influencia proliferação, diferenciação e tráfego vesicular. Em contextos hematopoéticos e epiteliais, alterações em RAPGEF1 têm sido associadas a mudanças na dinâmica das junções célula–célula e a redes de sinalização desreguladas relevantes para transformação oncogênica e para a função de células imunes. Como um nó de via que conecta a fosforilação em tirosina a respostas conduzidas por Rap, a C3G é frequentemente estudada em modelos de invasão, ativação de leucócitos e plasticidade da sinalização acionada por receptores.

C3G O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus RAPGEF1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de RAPGEF1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função RAPGEF1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com RAPGEF1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.