C23 (Nucleolin) Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421835

Panoramica

Ncl codifica C23 (nucleolina), un’abbondante fosfoproteina nucleolare che coordina la trascrizione dell’rRNA, la maturazione del pre-rRNA e l’assemblaggio dei ribosomi, sostenendo la proteostasi globale e la crescita cellulare. La nucleolina inoltre trasloca tra nucleo, citoplasma e superficie cellulare, influenzando l’organizzazione della cromatina, le risposte al danno al DNA, la stabilità dell’mRNA e gli output di segnalazione legati all’adattamento allo stress. Attraverso interazioni con il macchinario della RNA polimerasi I, complessi ribonucleoproteici e regolatori chiave del ciclo cellulare, C23 integra la funzione del nucleolo con le vie di proliferazione e apoptosi. Un’espressione o una localizzazione deregolate della nucleolina sono state associate a un’alterata biogenesi dei ribosomi, a programmi di traduzione aberranti e a fenotipi oncogeni, rendendola un bersaglio frequente negli studi di biologia tumorale e stress cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO C23 (Nucleolin) (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ncl in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ncl insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ncl a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina C23 (Nucleolin).

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ncl per lo studio della segnalazione di C23 (Nucleolin), studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ncl critici per la funzione di C23 (Nucleolin)
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ncl per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal C23 (Nucleolin) CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal C23 (Nucleolin) CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ncl. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal C23 (Nucleolin) Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR C23 (Nucleolin) (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ncl per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ncl definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.