C20orf54 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405094-ACT

SLC52A3 codifica o C20orf54, um transportador de riboflavina (vitamina B2) de alta afinidade que medeia a captação celular de riboflavina para sustentar a biossíntese de FAD e FMN. Ao regular a disponibilidade de cofatores flavínicos, o C20orf54 influencia o metabolismo oxidativo mitocondrial, a homeostase redox e vias dependentes de flavoproteínas, incluindo o transporte de elétrons e a oxidação de ácidos graxos. Alterações na atividade de SLC52A3 têm sido associadas a deficiências no transporte de riboflavina e a disfunções metabólicas e neurofisiológicas subsequentes, tornando-o relevante para o estudo do transporte de nutrientes, da bioenergética mitocondrial e da sinalização de resposta ao estresse.

C20orf54 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC52A3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

C20orf54 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC52A3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC52A3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de C20orf54. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC52A3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de C20orf54 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via C20orf54 em células tumorais com expressão de SLC52A3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.