C2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419389

概要

補体成分2（C2）は、マウスにおける古典経路およびレクチン経路の補体カスケードにおける中心的なセリンプロテアーゼ前駆体（ザイモーゲン）であり、C1sまたはMASP2によって切断されてC2aを生じ、C3コンバーチャーゼ（C4b2a）を形成します。この段階は補体活性化の増幅、オプソニン化、炎症性シグナル伝達、ならびに下流の膜侵襲複合体（MAC）形成を駆動し、自然免疫による認識を免疫複合体や病原体の除去へと結び付けます。C2活性はサイトカインネットワークやFc受容体依存性応答とも相互に関与し、免疫組織における白血球のリクルートや抗原提示のあり方を規定します。C2機能の変化は、自己免疫、感染感受性、炎症性の組織傷害機構に関連する補体制御異常の研究全般に広く関係します。

C2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるC2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、C2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、C2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、C2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、C2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、C2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• C2の機能に不可欠なC2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、C2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• C2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびC2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、C2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  C2 HDRプラスミド（m）および C2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはC2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のC2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。