C1r Double Nickaseプラスミド (h): sc-405842-NIC

C1R は補体 C1r をコードしており、C1r は C1q および C1s とともに C1 複合体を形成して古典経路補体カスケードを開始するセリンプロテアーゼです。活性化されると、C1r は C1s を切断して活性化し、下流での C4 および C2 の切断を促進するとともに、オプソニン化と炎症性シグナル伝達を促します。C1r の機能は、自然免疫による監視を免疫複合体のクリアランスやサイトカインネットワークの調節と結び付けます。C1R 活性の制御破綻や古典経路の不均衡は、補体介在性の炎症表現型や免疫複合体関連の組織障害と関連づけられており、免疫学研究における機序解明の標的としての有用性を支持しています。

C1r ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における C1R 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、C1R内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、C1Rの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、C1Rが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。