C1GALT1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403509-ACT

C1GALT1は、コア1β1,3-ガラクトシルトランスフェラーゼ1をコードしており、Tn抗原（GalNAc-Ser/Thr）をコア1（T抗原）構造へ変換することで、ムチン型O-グリカンの伸長に必須な、ゴルジ体局在の重要酵素です。この活性を通じてC1GALT1は、細胞表面および分泌性糖タンパク質の組成を規定し、上皮系および造血系の文脈において、レクチン結合、受容体の配置、プロテアーゼ抵抗性に影響を与えます。C1GALT1機能の変化は、細胞接着、遊走、免疫認識など、O-グリコシル化依存的なプロセスを攪乱し、炎症やがん関連表現型で観察される糖鎖リモデリングとも関連します。O-グリコシル化経路の中心的ノードとして、C1GALT1はムチン生物学、バリア機能、ならびにシグナル伝達の微小環境を調節する糖タンパク質オミクスの変化との関連で、しばしば研究対象となっています。

C1GALT1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性C1GALT1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

C1GALT1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における C1GALT1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はC1GALT1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性C1GALT1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のC1GALT1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるC1GALT1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびC1GALT1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるC1GALT1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。