C12orf48 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-408897-ACT

PARPBP (C12orf48) codifica a proteína de ligação a PARP1, um fator nuclear que se associa à PARP1 e sustenta a manutenção do genoma durante a replicação do DNA. Contribui para a estabilidade da forquilha de replicação e para respostas eficientes a danos no DNA, conectando processos de reparo associados à cromatina com a progressão da fase S. A função de PARPBP tem sido relacionada a vias que regulam o estresse replicativo, a sinalização de checkpoints e o controle do ciclo celular. Expressão desregulada ou dependência de PARPBP tem sido observada em contextos de instabilidade genômica, tornando-o relevante para o estudo da aptidão de células tumorais e de vulnerabilidades de reparo de DNA em modelos celulares humanos.

C12orf48 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PARPBP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

C12orf48 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PARPBP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PARPBP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de C12orf48. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PARPBP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de C12orf48 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via C12orf48 em células tumorais com expressão de PARPBP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.