C-Nap1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421134

概要

Cep250は、中心体に局在するコイルドコイルタンパク質C-Nap1をコードしている。C-Nap1は中心小体の近位端に集積し、中心体の結合（cohesion）および中心小体周囲物質（pericentriolar material）の編成に寄与する。C-Nap1は細胞周期によって制御される中心体ダイナミクスの中で機能し、キナーゼシグナルや足場タンパク質と協調して、両極性紡錘体の形成、正確な染色体分配、ならびに微小管構造の維持を支える。中心体の結合や紡錘体の完全性の破綻は、ゲノム不安定性、細胞分裂の異常、さらにモデル系における発生異常または神経変性様表現型と密接に関連している。このため、マウスの細胞・組織研究においてCep250は、増殖、分化、組織恒常性に影響する中心体関連経路を解析するための有用な結節点となる。

C-Nap1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCep250遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Cep250内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Cep250のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、C-Nap1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、C-Nap1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Cep250欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• C-Nap1の機能に不可欠なCep250エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Cep250ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• C-Nap1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびC-Nap1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Cep250遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  C-Nap1 HDRプラスミド（m）および C-Nap1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCep250ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCep250標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。