c-Mpl Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403035-ACT

MPL codifica o receptor de trombopoietina c‑Mpl, um receptor de citocinas de classe I que regula a manutenção de células‑tronco e progenitoras hematopoéticas e impulsiona a proliferação de megacariócitos e a produção de plaquetas. Após a ligação da trombopoietina, o c‑Mpl sinaliza pelas vias JAK2/STAT5, MAPK/ERK e PI3K/AKT para coordenar a sobrevivência, a diferenciação e programas transcricionais responsivos a citocinas. A desregulação da sinalização ou da expressão de MPL está associada à hematopoiese aberrante e é frequentemente estudada no contexto de neoplasias mieloproliferativas e síndromes hereditárias de trombocitopenia. Como receptor de superfície com leituras downstream bem definidas, o c‑Mpl oferece um ponto de intervenção acessível para investigar sinalização por citocinas, comprometimento de linhagem e hematopoiese de estresse em modelos celulares humanos.

c-Mpl O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MPL sem alterar a sequência de ADN subjacente.

c-Mpl O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MPL em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MPL, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de c-Mpl. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MPL nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de c-Mpl no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via c-Mpl em células tumorais com expressão de MPL silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.