c-Maf Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410543-ACT

MAF codifica c-Maf, um fator de transcrição do tipo zíper de leucina básico que controla a especificação de linhagem e programas de diferenciação em tecidos imunes e não imunes. c-Maf integra sinais de vias responsivas a citocinas e ao estresse para regular redes transcricionais envolvidas na polarização de células T, na função de macrófagos e na adaptação celular a sinais metabólicos. Por meio da modulação da atividade de enhancers e da cooperação com outros reguladores transcricionais, c-Maf influencia processos como proliferação, sobrevivência e expressão de genes efetores. A expressão ou atividade desregulada de MAF tem sido associada a alterações na homeostase imune e a estados transcricionais observados em diversos contextos de pesquisa em doenças hematológicas e inflamatórias.

c-Maf O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAF sem alterar a sequência de ADN subjacente.

c-Maf O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAF em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAF, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de c-Maf. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAF nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de c-Maf no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via c-Maf em células tumorais com expressão de MAF silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.